Му 287-113 методические указания по дезинфекции, предстерилизационной очистке и стерилизации изделий медицинского назначения 2020 год. последняя редакция

Контроль осуществляют при следующих режимах работы дезинфекционных камер:

Срок годности — 12 месяцев.

3.1. Исследования бактериальной обсемененности воздушной среды

3.1.1. Исследования бактериальной обсемененности
воздушной среды проводят в помещениях лечебных организаций в зависимости от их
функционального назначения на санитарно-микробиологические показатели:

общее количество микроорганизмов в 1 м3
воздуха (КОЕ/м3);

количество колоний S.
aureus в 1 м3 воздуха (КОЕ/м3);

количество плесневых и дрожжевых грибов в
1 м3 воздуха.

3.1.2. Пробы воздуха отбирают
аспирационным методом с помощью аппаратов и устройств, разрешенных к применению
в установленном порядке.

Количество пропущенного воздуха должно
составлять 100 дм3 для определения общего количества
микроорганизмов, дрожжевых и плесневых грибов и 250 дм3 для
определения S. aureus. Исследование воздуха седиментационным методом не
допускается.

3.1.3. Для определения общего количества
микроорганизмов в 1 м3 воздуха забор проб проводят на питательный
агар типа МПА, СПА, ГРМ-агар и другие, приготовленные согласно инструкций по
применению. Посевы инкубируют при температуре 37 °С в течение (48 ± 2) ч,
подсчитывают количество выросших колоний и производят перерасчет на 1 м3
воздуха. При наличии роста колоний дрожжевых и плесневых грибов, их
подсчитывают и делают пересчет на 1 м3 воздуха. В протоколе
количество дрожжевых и плесневых грибов указывают отдельно.

Примечание: При переносе аппаратов и
устройств для отбора проб воздуха из одного помещения в другое их поверхность
обрабатывают раствором дезинфицирующего средства. Столик, внутренние стыки,
крышку и прочие части прибора с внутренней и внешней стороны протирают спиртом
(70 %).

1. Первый день.

Для определения наличия S.
aureus забор проб проводят на желточно-солевые среды на
основе сред: элективно-солевой агар, стафилококк-агар, маннитолагар или среда №
10 по ГФ XII, агар Байд-Паркер. Чашки с посевами инкубируют в
термостате при 37 °С (48 ± 2) ч.

2. Второй-третий день.

На вышеуказанных средах стафилококк
растет в виде круглых, блестящих, маслянистых, выпуклых, пигментированных
колоний. Следует учитывать, что стафилококки, выделенные от человека, дают
положительную лецитовителлазную реакцию в 60 — 70 % случаев. Отвивка на
скошенный агар для дальнейшего исследования не менее 2 колоний, подозрительных
на стафилококк. Для исследования отвивают прежде всего колонии, дающие положительную
лецитовителлазную реакцию (образование радужного венчика). При отсутствии на
чашках таких колоний дальнейшему исследованию подвергаются пигментированные
колонии, схожие по морфологии со стафилококком. При одновременном наличии на
чашках колоний стафилококка, отличающихся по пигменту, следует отвивать не
менее двух колоний различного вида. Пробирки с посевом помещают в термостат при
37 °С на (24 ± 2) ч.

3. Четвертый день.

После инкубации у выделенных штаммов
проверяют морфологию, тинкториальные свойства (окраска по Граму) и наличие
плазмокоагулирующей активности в реакции плазмокоагуляции (РПК).

Окраску по Граму проводят общепринятым
методом. Под микроскопом окрашенные по Граму стафилококки имеют вид
фиолетово-синих кокков, располагающихся гроздьями или небольшими кучками
(«кружево»).

Если культура обладает только
плазмокоагулирующей или только лецитовителлазной активностью, то для
окончательного ответа требуется учитывать другие признаки, позволяющие
определить принадлежность штамма к виду S. aureus (ферментация маннита, гемолитическая активность).

При необходимости, после выделения чистой
культуры, проводят определение чувствительности/устойчивости к антибиотикам,
дезинфицирующим средствам, бактериофагам.

4. Пятый день.

Учет результатов дополнительных тестов.
Окончательная выдача ответа.

6.1. Требования к помещению для посева на стерильность

6.1.1. Контроль стерильности изделий
проводят с соблюдением асептических условий, исключающих возможность вторичной
контаминации изделий микроорганизмами.

Контроль стерильности изделий проводят в
боксах с ламинарным потоком воздуха. При отсутствии боксов с ламинарным потоком
воздуха контроль стерильности проводят в боксированных помещениях (бокс с
предбоксником).

6.1.2. В боксированном помещении
поверхность пола, стен, потолка, мебели должна быть гладкой, без щелей,
устойчивой к многократному действию моющих и дезинфицирующих средств. Полы должны
быть нескользкими, иметь гидроизоляцию. Поверхность столов не должна иметь швов
и трещин.

6.1.3. Боксы оборудуют приточно-вытяжной
вентиляцией (с преобладанием притока над вытяжкой) с подачей в них воздуха
через бактериальные фильтры. В боксе и предбокснике устанавливают бактерицидные
облучатели в соответствии с нормами, предусмотренными действующими
нормативно-методическими документами.

3.2. Определение сульфитвосстанавливающих клостридий в лечебных грязях

Сульфитвосстанавливающие клостридии, преимущественно C.
perfingens, — крупные неподвижные палочки, не образующие цепочки,
грамположительные, анаэробные, толстые с «обрубленными» или слегка
закругленными концами, жгутиков не имеют, образуют споры. Характерным признаком
является высокая ферментативная активность, расщепление сахаров с образованием
кислоты и газа, быстрое и бурное свертывание молока с образованием сгустка и
отделением сыворотки, а также способность редуцировать сульфит натрия (NA₂SO₃)
при 45 ± 1 °С в течение 16 — 18 часов на железо-сульфитной среде.

1 мл основного и последующих разведений лечебной грязи (0,1;
0,01) переносятся в два ряда параллельных пробирок. Один ряд пробирок
прогревают при температуре 80 °С в течение 15 минут или 90 °С в течение 10
минут для уничтожения вегетативной микрофлоры. Затем во все пробирки наливают
по 9 — 10 мл среды Вильсон-Блера, приготовленной extempore.

Пробирки заливают расплавленной средой (50 — 60 °С) и быстро
опускают в холодную воду для немедленного охлаждения и удаления воздуха из
среды.

Инкубируют посевы при температуре 44 — 45 °С в течение 24 часов.
При наличии клостридий в пробирках через 4 — 5 часов образуются колонии черного
цвета. Микроорганизмы фекального происхождения при 45 °С такую реакцию не дают.

После учета черных колоний производят их пересев на молочную
среду для дальнейшей идентификации. Для этого петлей переносят колонии в
пробирки с молочной средой, которые инкубируют при 44 — 45 °С 24 часа.

При развитии клостридий наблюдается образование губчатого
сгустка молока, приподнятого кверху, жидкость при этом становится прозрачной,
слегка желтоватой.

Для подтверждения наличия клостридий проводят
микроскопирование. Обнаружение грамположительных палочек указывает на
присутствие клостридий.

Титр устанавливают по максимальному разведению, в котором
обнаружены клостридии.